卵巢癌的基因治疗研究现状及展望

　　基因重组技术可利用肿瘤细胞表面一些特异性高表达的受体或抗原,编码与这些受体或抗原特异性结合的基因片段插入到病毒外壳糖蛋白(Env)基因中,使该载体表面出现一种嵌合Env,从而提高病毒对宿主细胞的亲和性,同时降低它与非靶细胞结合的机会[10]。结构蛋白VP22是Ⅰ型单纯疱疹病毒的主要壳膜蛋白,有细胞间扩散作用的特性,可改善基因治疗效率。VP22和胸苷激酶(tk)融合基因及丙氧鸟苷自杀基因系统对肿瘤细胞具有特异靶向性生长抑制作用,利用卵巢癌细胞表面高表达的Ⅰ型跨膜粘蛋白MUC1,将抗MUC1单链抗体ScFv与VP22 载体的包膜结构VSVG的转膜区和胞质区部分构建到一起，以此膜结构包装的目的基因VP222tk能靶向性的结合并杀伤表达MUC1的卵巢癌肿瘤细胞[11~13]。

　　近年来研究发现,柯萨奇腺病毒受体(CAR)在病毒细胞的入口中起决定作用，在腺病毒载体的临床实验中,CAR表达水平上调有利于腺病毒基因系统导入卵巢癌细胞系,并增强表达p53腺病毒的细胞毒作用，该作用是由于CAR是细胞黏附蛋白,并可分裂细胞与细胞间的连接,因而使腺病毒基因系统更易导入癌细胞[14-15]。此外，在卵巢癌细胞系和原发卵巢癌中表达的CD40是肿瘤坏死因子受体超家族成员之一,在CD40腺病毒靶向系统中可增加靶基因融合蛋白的数量并有剂量依赖性,CD40 介导的载体病毒转染可被用于不依赖CAR途径的基因转换,这就解决了CAR表达水平低的肿瘤细胞基因转染问题[16]。

　　4 卵巢癌的基因治疗策略

　　4.1 自杀基因治疗 自杀基因治疗卵巢癌是近年来研究的热点，其中有组织特异性启动子OSP-1(ovarian-specific promoter-1)参与调控，使自杀基因单纯疱疹病毒胸苷激酶(erpes simplex virus thymidine kinase，HSV-tk)与前体药物无环鸟苷(ganciclovir，GCV)结合，HSV-tk/GCV通过转染肿瘤细胞使tk基因在癌变的组织或细胞中特异地表达，从而使无毒的前体药物GCV转化为有细胞毒性的磷酸化的GCV产物，抑制DNA酶活性，阻止DNA合成，进而杀灭肿瘤细胞。HSV-tk 抗肿瘤效应的另一原理是“旁观者效应(bystander effect)”，即转导细胞对非转导细胞的细胞毒作用。已证实腺病毒介导的HSV-tk基因治疗裸鼠间皮瘤、结直肠癌、卵巢癌实验中可使肿瘤消退[17-18]。体外研究结果显示：与间皮细胞结合的HSV-tk对GCV杀灭肿瘤细胞的作用非常敏感，能增强GCV 的“旁观者效应”，使肿瘤生长受到明显抑制[19]。

　　4.2 基因表达封闭——RNA干扰(RNAi) RNAi在哺乳类动物细胞中是利用同源双链小干扰RNA(small interference RNA，siRNA)诱导特异性基因表达抑制，其主要发生于转录后基因水平，所以又称为转录后基因沉默(post transcription gene silencing，PTGS)。双链RNA(double strand RNA，dsRNA)首先被切割为siRNA，siRNA 与一些蛋白形成RNA 引导的沉默复合物(RNA induced silencing complex，RISC)，介导基因表达沉默。由于RNAi的特异性、高效性、方便性，已成为研究基因功能、肿瘤基因治疗的新方法。Wani等[20]利用RNAi技术抑制肝细胞刺激因子-1在卵巢癌透明细胞瘤中的表达，使其mRNA水平分别降低45%，并诱导其细胞凋亡增加。Bignotti等[21]将脂肪酸合酶(fattyacid synthase，FAS)的siRNA转染到培养的卵巢癌SKOV3细胞中，导致FAS基因的表达沉默，与对照组相比，HER2的表达下降60%并诱导细胞凋亡。以上研究结果表明，利用RNAi技术对于治疗和预防卵巢癌具有一定的作用并显示出巨大的发展潜力。

　　4.3 多药耐药基因治疗 化疗是治疗卵巢癌的常用和有效的手段，但肿瘤细胞对多种化疗药物产生交叉抗药性(multidrug resistance，MDR),是造成化疗失败的主要原因。P-糖蛋白(P-glycoprotein，P-gp)在卵巢癌细胞中过表达，与卵巢癌化疗的多药耐药的发生密切相关，而P-gp被MDR基因所编码。研究者利用反义寡脱氧核苷酸(antisense oligodeoxynucleotides，ODNs)抑制MDR基因而降低P-gp的转录，其中双链ODNs比单链ODNs作用更有效，可阻遏卵巢癌细胞A2780中P-gp的表达，提高肿瘤细胞对化疗药物的敏感性[5，9]。Bcl-2基因在卵巢癌细胞

上一页  [1] [2] [3] [4] [5] 下一页