质体(商品名：力扑素，南京思科药业有限公司)，30mg/瓶，国药准字H20030357，用10mL 50g/L葡萄糖注射液稀释，专用震荡器振摇5min后使用。DMEM高糖细胞培养基为Hyclone生物化学制品，产品标准号：Q/SY HKL001。胎牛血清(PAA细胞公司)。胰蛋白酶、二甲基噻唑二苯基四唑溴盐(MTT, Sigma)。Annexin VFITC凋亡检测试剂盒(北京大学人类疾病基因研究中心)。
1.3 细胞培养 选用雌激素受体阳性的人子宫内膜癌细胞系Ishikawa细胞，于含100mL/L胎牛血清的DMEM高糖培养基中，在恒温培养箱(Heraeus)中以50mL/L CO2 、37℃及饱和湿度条件下传代培养。设对照组(普通培养基)、紫杉醇脂质体0.01μmol/L组、0.1μmol/L组、1μmol/L组、10μmol/L组和100μmol/L组。
1.4 MTT检测 取进入对数生长期的细胞，以3×105/L接种于96孔培养板中，每组设8个平行孔。细胞铺板培养24h贴壁后，每孔加入150μL相应浓度的含药培养基，24、48、72、96h后，每孔加入5mg/mL的MTT溶液20μL，继续培养4h，吸弃孔内培养基，每孔加入100μL盐酸异丙醇(浓盐酸与异丙醇的体积比为1∶250)，震荡摇匀10min，室温静置20min后，在酶联免疫检测仪(BilRad Model 550)上选择570nm波长测定各孔吸光度(A)值，并计算细胞存活率，即：细胞存活率=实验组平均A值/对照组平均A值×100%。重复上述实验3次，取其均值。
1.5 倒置显微镜下观察细胞形态 应用IX71141型倒置显微镜(日本OLYMPUS公司)分别观察对照组及紫杉醇脂质体各组作用Ishikawa细胞24、48h的细胞形态。
1.6 流式细胞仪检测细胞凋亡和细胞周期的变化 各组培养48h，分别以2.5g/L胰酶消化收集细胞106个，冷PBS冲洗2次，收集并离心弃上清，细胞各分两管分别检测细胞凋亡和细胞周期。检测细胞凋亡管分别加入200μL Binding Buffer和FITC标记的Annexin V(20μg/mL)10μL/管，避光反应30min，再加PI(50μg/mL)4μL，避光反应5min，补齐Binding Buffer至500μL，立即(一般不超过1h)进行流式细胞术检测细胞凋亡。检测细胞周期管分别加入800mL/L冷乙醇固定，4℃过夜，冷PBS冲洗，离心弃上清，加300μL PBS，10mg/mL的Rnase A溶液15μL混匀，37℃孵育30min，加1mg/mL的PI染液混匀，暗室中放置30min后，转入流式管以FACSort流式细胞仪(FACSCalibur，美国BD公司)进行荧光检测，ModFit LT软件分析细胞周期各时相的特点。重复上述实验2次，取其均值。
1.8 统计学处理 使用SPSS13.0统计软件包处理，数据用±s表示，进行重复测量的方差分析，P<0.05为差异有统计学意义。
2 结 果
2.1 紫杉醇脂质体对子宫内膜癌Ishikawa细胞的生长抑制作用 MTT法检测结果显示：不同浓度的紫杉醇脂质体作用Ishikawa细胞24～96h，相同药物浓度下，随着作用时间的延长，细胞存活率逐渐降低(P<0.05，图1);相同作用时间下，随着药物浓度的升高，细胞存活率逐渐降低(P<0.05，图2)。提示紫杉醇脂质体对子宫内膜癌Ishikawa细胞有抑制和杀伤作用，并呈浓度和时间依赖性。
2.2 倒置显微镜下观察紫杉醇脂质体作用24、48h Ishikawa细胞形态学变化 对照组的Ishikawa细胞胞质透亮，细胞形态规则，呈细长多边形，贴壁良好，排列紧密，呈对数生长。不同浓度紫杉醇脂质体作用后，随着药物浓度的增加和作用时间的延长，细胞固缩，胞质减少，形态轮廓不清晰，部分细胞核膜消失，细胞皱缩变圆，崩解坏死，碎片增加，细胞核碎裂，细胞脱壁至悬浮状态。紫杉醇脂质体作用Ishikawa细胞48h，可见到凋亡细胞，随着药物浓度的增加，从1μmol/L浓度起，白色的脂质体沉积逐渐明显(图3)。
2.3 流式细胞仪检测细胞凋亡和细胞周期的变化 紫杉醇脂质体作用Ishikawa细胞48h，细胞凋亡情况及细胞周期变化见图4和图5。结果显示细胞凋亡率显著增加(P<0.05);S期细胞所占比例减少。提示紫杉醇脂质体可抑制Ishikawa细胞增殖(表1)。
3 讨 论
紫杉醇是一种具有独特结构和独特作用机制的高效、广谱、天然抗
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