ial deletions of the FHIT gene in the group with HPV16 infection (29/37) was significantly higher than that in the group without HPV16 infection (9/21) and the correlation was found between aberration of FHIT transcript and HPV16 infection. There was no obvious difference in age, stage, tumor size, grade and lymph node metastasis between the groups with and without FHIT abnormalities and HPV16 infection (P>0.05). ③ The exon 5 and exon 6 were mainly deleted in the altered FHIT transcripts and no insertion and point mutation were found by DNA sequencing. Conclusion Aberrant FHIT expression was significantly common in cervical cancers and was correlated with HPV16 infection. These findings suggest that the tumor suppressor gene FHIT and high risk HPV16 may play a very important role in human cervical carcinogenesis.
KEY WORDS: cervical cancer; fragile histidine triad (FHIT); deletion; human papillomavirus 16 (HPV16)
子宫颈癌是世界范围内女性第二位常见的恶性肿瘤，每年死亡人数超过27万[1]。研究表明子宫颈癌的发生与高危型HPV感染和宫颈组织内众多基因表达改变有关，包括HPV16和定位于染色体3p14.2的脆性组氨酸三联体(fragile histidine triad, FHIT)基因等[2-3]。由于FHIT基因区域覆盖3p上的HPV16的整合位点，两者在子宫颈癌发生中的作用及其相互关系值得探讨[4]。本研究采用RT-PCR方法在宫颈鳞癌中检测FHIT基因的转录表达，并同时检测HPV16的感染情况，现将结果报道如下。
1 材料与方法
1.1 研究对象
1.1.1 细胞株
5种宫颈癌细胞株(SiHa、HeLa、RJC-1、CS1213、C4-1)均由西安交通大学医学院第一附属医院实验医学中心提供，其中CS1213和RJC-1细胞为该中心实验室自建[5]。
1.1.2 临床病例
选择2003年9月至2004年5月间西安交通大学医学院第一附属医院妇产科和肿瘤科初诊初治的宫颈癌患者58例，年龄39-70岁，均无内外科合并症。病理类型均为鳞状细胞癌;临床分期[按国际妇产科联盟(FIGO)标准,2000年]：Ⅰ期18、Ⅱ期24例、Ⅲ-Ⅳ期16例;病理分级：Ⅰ级10例、Ⅱ级22例、Ⅲ级26例;有盆腔淋巴转移7例，无转移51例。正常对照18例为同期患良性子宫肌瘤或功能性子宫出血行全子宫切除术，术后宫颈组织病理检查报告为正常宫颈上皮，无其他疾病，年龄38-62岁。
1.2 研究方法
1.2.1 标本采集
宫颈癌细胞生长在RPMI-1640培养基(含100mL/L的新生小牛血清，100 u/mL的青霉素，100 u/mL链霉素)，37 ℃，5%(体积分数)的CO2条件下传代培养，收集时用2.5 g/L(0.25%)胰蛋白酶消化，PBS缓冲液洗涤，离心管(均经DEPC水处理，高压蒸汽消毒)收集，每支离心管细胞数达到5×106-10×106。组织标本取宫颈癌患者手术切除或放疗前活检标本，避开坏死和炎症区域，组织块大小0.5 cm×0.5 cm×0.3 cm，同法收集正常宫颈组织。收集的细胞及组织在30 min内置液氮中保存，所有标本均经病理检查证实。
1.2.2 引物设计
FHIT和HPV16基因的引物序列
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