e expression of MMP-9 and MMP-2 protein in villi of the abortion group was significantly lower than that of the control group (P<0.05). The expression of RECK protein in villi was significantly higher in the abortion group than in the normal control group (P<0.05); ③The expression of RECK protein in villi of first trimester had significant negative-correlation with that of MMP-2 and MMP-9.Conclusion The increase in the expression level of RECK inhibited the activation of MMP-9 and MMP-2, and resulted in a decrease in the trophoblastic invasion of human placenta, which might be correlated with occurrence of first trimester spontaneous abortion.
Key words：spontaneous abortion, first trimester; villi; RECK; matrix metalloproteinases
妊娠是成功的半同种异体移植现象，滋养层细胞对子宫蜕膜的侵入以及对子宫螺旋小动脉的 “血管重铸” 是孕卵着床后胎盘建成的关键步骤。研究表明，多种因素造成自然流产时伴有滋养细胞某些生物学行为的改变，尤其是滋养细胞侵袭力不足，螺旋小动脉不能转化为低阻力血管，胎盘局部缺血缺氧,这可能与早期自然流产(early spontaneous abortion，ESA)发生有关。Guo等[1]前期研究结果表明基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase，MMP)抑制基因RECK(reversion-inducing-cysteine-rich protein with Kazal motifs)及MMP-2在正常早孕滋养细胞的侵袭中起着重要作用，然而RECK在人类早期自然流产中的研究网上检索未见报道。本实验采用半定量RT-PCR和Western blotting方法研究自然流产患者绒毛组织中RECK、MMP-2和MMP-9等基因的表达情况，探讨其与自然流产发生的关系。
1 材料和方法
1.1 研究对象 选择2009年1月至2009年6月在徐州市妇幼保健院妇科门诊就诊的自然流产患者20例为流产组，停经时间在12周以内，患者平均年龄(30.3±4.4)岁,平均孕周为(9.3±2.9)周。选择同期正常早孕自愿要求终止妊娠者共20例为对照组，平均年龄(29.6±4.3)岁，平均孕周为(7.9 ±2.5)周，术前B超证实胎儿发育正常，既往无不良妊娠史。2组平均年龄及流产时平均孕周无显著差异;均排除严重的内科疾病以及传染性疾病和生殖道感染，亦未发现生殖道畸形。
1.2 方法
1.2.1 标本采集 在无菌操作下采集离体绒毛组织，用PBS液冲洗后立即置于液氮中速冻后-80℃保存待用。
1.2.2 RT-PCR检测mRNA 用Trizol-离心柱法提取总RNA，用RT-PCR方法检测上述标本中RECK、MMP-2和MMP-9的mRNA表达水平。引物按照参考文献[2]由上海英骏生物有限公司合成。
RECK引物：上游引物为5′-TGC-AAG-CAG-GCA-TCT-TCA-AA-3′， 下游引物为5′-ACC-GAG-CCC-ATT-TCA-TTT-CTG-3′，设β-actin作为内参照。PCR反应条件：94℃预变性3 min，94℃变性15 s,55～63℃退火和延伸30 s,36个循环后再72℃延伸5 min，补平PCR产物的延伸末端。
MMP-9引物：上游引物为5′-CCT-GGA-GAC-CTG-AGA-ACC-AAT-C-3′， 下游引物为5′-GAT -TTC-GAC-TCT-CCA-CGC-ATC-T-3′。PCR反应条件：94℃预变性3 min，94℃变性30 s，62℃退火和延伸45 s，36个循环后7
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