孕妇血浆中胎儿游离DNA及抗DNA抗体与子痫前期的相关性研究

　　1.2 方法

　　(1)标本采集：在分娩前，入院当天用抗凝管采取两组孕妇外周静脉血各3ml,血样本3000r/min离心，离心后血浆移入无菌管中，-80℃保存，待分娩后证实为男婴集中检测。(2)DNA提取：DNA提取采用TaKaRa Blood Genme DNA Extractoin Kit(宝生生物工程有限公司，中国)提供的DNA提取试剂，从血浆中提取胎儿DNA，操作步骤按说明书进行。(3)性别决定基因(SRY)PCR引物设计：使用Y染色体上的SRY位点对男性胎儿DNA进行定量，正向引物5，-GCGACCATGAACGCATT-3’，反向引物5，-GCCATCTTGCGCCTCTGAT-3’，一个双标Taq Man-MGB 荧光探针为5’-(FAM)ATCGTGTGGGTCTGAT(TAMRA)-3’(以上物质均由基康公司合成)。(4)FQ-PCR定量胎儿DNA：PCR扩增反应体系采用Tag Man PCR 有Core Reagent Kit。反应体系总体积18μl，Taq Man PCR Mix：9μl,探针(10μm)：0.45μl，正向引物(20μm)：0.81μl,反向引物(20μl)：0.81μl，去离子水：0.93μl。制备SRY基因DNA标准管5.0×10、5.0×102、5.0×103、5.0×104copies/ml，取样本及标准管各6μl加入到已加有反应液的扩增管加盖，2000rpm离心20s使混匀。在Light Cycler扩增仪上按以下程序进行扩增及计算样本中DNA的量：50℃ 3min;95℃ 10min：(95℃ 10s，60℃ 30s)循环45次，37℃5s。在60℃时收集荧光信号，方式为“Single”，通道为F1。本试验最低检测限为10copies/ml。(5)抗ss-DNA抗体及抗ds-DNA抗体定量:抗ss-DNA及抗ds-DNA抗体的定量均采用德国欧蒙ELISASHA试剂盒,在BIO-RAD酶标仪上进行吸光度检测,检测波长为450nm，严格按照实际说明书操作。

　　1.3 统计学方法

　　原始数据用SAS 8.1统计软件处理，数据呈正态分布时比较用t检验，非正态分布时采用Wilcoxon符号秩和检验。

　　2 结果

　　2.1 两组孕妇外周血中胎儿游离DNA水平比较

　　观察组孕妇外周血中胎儿游离DNA水平明显高于对照组，有统计学意义(P<0.01)，不同程度子痫前期患者孕妇血中胎儿游离DNA水平分别与对照组比较有统计学意义(P<0.01)。见表1。

　　2.2 两组孕妇抗ss-DNA及抗ds-DNA抗体比较

　　子痫前期组孕妇血浆抗ss-DNA抗体与对照组比较有统计学意义(P<0.05)。观察组孕妇血浆抗ds-DNA抗体与对照组比较，无统计学意义(P>0.05)。见表1。表1 各组孕妇血浆中胎儿游离DNA水平和抗ss-DNA及抗ds-DNA抗体水平比较(略)

　　2.3 孕妇血浆中胎儿游离DNA与抗ss-DNA及抗ds-DNA抗体的相关性

　　观察组孕母血浆中胎儿游离DNA与抗ss-DNA抗体无明显相关性(r=0.1275,P>0.05)，与抗ds-DNA抗体也无显著相关性(r=0.245，p>0.05)。抗ss-DNA与抗ds-DNA抗体呈正相关关系(r=0.5983,P<0.05)。

　　2.4 母血中胎儿游离DNA与胎儿体重的相关性

　　观察组孕母血中胎儿游离DNA与胎儿体重无明显相关性(R=-0.06618，P>0.05)，对照组孕母血中胎儿游离DNA与胎儿体重亦无相关性(R=0.07694,P>0.05)。观察组孕母血中抗ss-DNA抗体与胎儿体重无相关性(R=0.12010,P>0.05),对照组孕母血中抗ss-DNA抗体与胎儿体重亦无相关性(R=-0.03790,P>0.05)。观察组孕母血中抗ds-DNA抗体与胎儿体重无相关性(R=-0.05610,P>0.05),对照组孕母血中抗ds-DNA抗体与胎儿体重亦无相

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