为6.0的0.01 mol/L枸橼酸溶液中进行抗原修复，加入MDM2单抗(MDM2 为1∶50稀释)，湿盒中4℃过夜,加EnVision复合物室温30 min,DAB显色,苏木精对比染色、脱水、透明、封固。
结果判断标准：光镜下组织细胞核或胞质存在棕黄色颗粒为阳性。根据阳性细胞在组织中所占面积分为4个等级:<10%为(-)、10%～25%为(+)、25%～50%为()、>50%为()。
1.3 统计学分析
采用SPSS10.0软件包，应用χ2检验、spearman相关分析法对研究结果进行统计学分析。
2 结 果
2.1 子宫内膜癌病理组织学分类与p15表达关系
本组正常子宫平滑肌组织10例中p15表达均为阴性。子宫肌瘤14例中9例为阳性表达，只有1例过度表达(7%);子宫交界性癌7例中5例阳性，其中4例出现过度表达(57%);而子宫内膜癌29例全部都为阳性，其中23例过度表达(79%)，三组资料间差异有显著性(P<0.05)。可见从子宫肌瘤到子宫内膜癌，p15的表达量明显进行性增高(P<0.01)。
2.2 子宫内膜癌组织形态特征与p15表达关系
p15表达量随细胞分裂相的增加而明显增高。研究发现当细胞分裂相在5个/10高倍视野(HFP)以上时，p15表达量均有显著提高，并绝大多数出现过度表达。p15表达在低水平时(FI≤1.30)，5年生存率高达100%，而p15过度表达时(FI>1.30)，5年生存率很低，小于50%。经统计学处理，两组生存率比较有显著性差异(P<0.01)。
2.3 MDM2蛋白表达情况 MDM2的表达在子宫内膜样癌为48.28%、非子宫内膜样癌为41.5%，都明显低于功能性子宫出血诊断性刮宫标本的60.2%(P<0.01)。
3 讨 论
肿瘤的发生是一个多因素多步骤的慢性病理过程。近年来研究表明细胞周期的失控是导致肿瘤发生的重要原因。而细胞增殖的关键是G1期的启动。G1期的启动除受周期素(Cyclin)和周期素依赖性激酶(Cyclindependentknases,CDK)的正向控制外,还受到一些细胞周期调控相关基因的制约。如果这种负向调控作用丧失,细胞就会生长失控、转化,导致肿瘤的发生〔2〕。p15基因又称多肿瘤抑制基因MTS2,定位于人染色体9P21区,所编码的p15蛋白为细胞周期蛋白D/CDK激酶的抑制因子,p15蛋白与CDK4和CDK6结合,抑制CDK4cyclinD和CDK6cyclinD,抑制细胞增殖。p15基因纯合子缺失或过度甲基化导致该基因失活,使细胞无限制生长。p15蛋白的表达和子宫内膜癌的关系比较密切，p16和p15的表达具有一致性，且功能上有一定的互补作用〔3，4〕。
本文将子宫内膜癌的p15特征与其组织学各主要指标进行对比研究发现，随着细胞分裂相的增加及细胞异型性和细胞密度的增大，p15表达量明显增高。当分裂相增多或出现轻度异型性，p15表达量明显增高，并绝大多数为过度表达。所以，子宫内膜癌诊断中，一旦发现细胞分裂相或轻度异型性就诊断为恶性。
Combart等研究发现p15基因的纯合子缺失出现在p16基因发生纯合子缺失时,而p16发生纯合子缺失时不一定出现p15的缺失,故认为p15可能补充p16的缺失。目前已公认p16缺失导致肿瘤的发生,但如果再有p15的缺失则更易导致肿瘤的发生。Kudoh等〔5〕对p16及p15基因与卵巢癌化疗敏感性的关系进行研究发现，铂类化疗6个月后，经二次手术证实，不敏感组的p16及p15基因缺失率较敏感组明显升高，而且p16、p15基因缺失者的预后也较基因表达者更差。总之，本组资料中，50例原发性子宫内膜癌中MDM2蛋白的表达阳性率为48.28%，因而说明原发性子宫内膜癌中同时存在p15、p16基因的改变。原发性子宫内膜癌组织中p16与p15蛋白表达的相关性研究为探讨妇科肿瘤的发病机制提供了重要依据,并为临床上对妇科恶性肿瘤的诊断和监控提供了辅助手段。本组观察到p15低表达的患者5年生存率为100%，而过度表达者5年生存率明显降低(<50%)，可见p15过度表达时肿瘤分化差、恶性度高、预后差。所以p15表达可作为判断子宫内膜癌病人预后的一项客观指标。
【参考文献】
1 Kamb A，Gru NA，WeaverFeldhaus J，et al.A cell cycle regulator potentially involved
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