Eag1钾离子通道在宫颈癌中的表达以及缺氧对其的调控

　　2 结果

　　2.1 Eag1蛋白在不同宫颈病变中的表达

　　2.1.1 Eag1在慢性宫颈炎、宫颈上皮内瘤样变及宫颈鳞癌中的表达 Eag1在3种组织中均为细胞质、胞膜表达，细胞核未见表达。Eag1在慢性宫颈炎及宫颈上皮内瘤变中呈轻度着色，Eag1在宫颈鳞癌中呈中强度着色，阳性信号弥漫分布于癌巢内(图1、2、3)。Eag1在宫颈鳞癌中的表达率明显高于慢性宫颈炎组和宫颈上皮内瘤样变组，宫颈上皮内瘤样组内Eag1表达率明显高于慢性宫颈炎组，差异有显著性(P<0.01)。结果见表1。

　　2.1.2 Eag1在各级宫颈上皮内瘤样变中的表达 由表2可见，Eag1在CIN各级之中的表达随病变程度的增高逐渐增高，但各组比较差异无显著性(P>0.05)。图1 Eag1蛋白在慢性宫颈炎

　　2.1.3 Eag1表达与宫颈癌临床病理学指标的关系 Eag1在不同病理分级中的阳性表达率虽然随病变恶性程度的增高逐渐增高，但各组比较差异无显著性(P>0.05)。在不同的临床分期中，Ⅰ+Ⅱ组Eag1表达明显高于0期(P<0.01)，而Ⅲ+Ⅳ期组Eag1表达明显高于Ⅰ+Ⅱ组和0组(P<0.01)，差异有显著性。结果见表3。表3 Eag1表达与宫颈癌临床分期、病理分级的关系注:①G 1 and G2;② G2 and G3;③ G 1 and G3;④ 0 andⅠ+Ⅱ;⑤Ⅰ+Ⅱand Ⅲ+Ⅳ;⑥Ⅲ+ⅣI and Ⅰ+Ⅱ

　　2.2 缺氧对Eag1 mRNA表达的影响 采用RT-PCR法检测了Eag1 mRNA在不同缺氧条件下宫颈癌Hela细胞系的表达情况，给予不同缺氧条件，3h后Hela细胞中其mRNA的表达水平不尽相同，随缺氧程度的增加呈现先增高后降低的趋势(图4);在5%O2氧浓度条件下，其表达随缺氧时间的增加逐渐增高(图5)。

　　Eag1 mRNA水平变化。2.3 在全细胞膜片钳方式下分电流钳和电压钳两种模式分别记录的正常和缺氧后Hela细胞膜钾离子电压、电流特性

　　2.3.1 缺氧对膜K+通道电流幅值的影响 采用电压钳制方式分别给3组细胞施以保持电压(holding potential，HP)，对细胞进行去极化电压钳制，测试电压(test potential，TP)范围为-100～+60 mV，HP=-60 mV时，脉冲阶梯步长为20mV，刺激频率为0.2Hz。缺氧组引出15例跨膜K+电流图，随着测试电压的增大，K+电流幅值也增加，具有电压依赖性，在高钳制电压下(+80～+100 mV)K+电流具有失活趋势，膜K+电流具有内向整流特点(图6);缺氧组K+电流峰值明显升高，差异有显著性，缺氧+4-AP组电流幅值的变化则小于单纯缺氧组，如表6、图6所示。表6 不同TP下正常组和缺氧组及缺氧+4-AP组Hela膜K+电流幅值比较

　　2.3.2 缺氧、缺氧+4-AP组和正常组Hela细胞激活的时间常数(τ) 用Clampfit程序对电流激活时间过程进行拟合，证实可用单指数进行拟合，记录到缺氧、缺氧+4-AP组和正常组Hela细胞在不同TP下激活电流曲线的时间常数τ值(见表7)。两两比较：缺氧组与缺氧+4-AP组和正常组比较差异均有显著性(P<0.01)。表7 缺氧、缺氧+4-AP组和正常组Hela在不同TP下激活电流曲线时间常数τ值

　　2.3.3 常氧、缺氧、缺氧+4-AP组Hela细胞膜电容与K+通道电流密度 各组分别检测15例，缺氧组细胞膜电容虽大于其他两组，但两两比较差异无显著性(P>0.05);电流密度比较，缺氧组明显高于对照组，缺氧+4-AP组虽有所增高，但仍显著低于单纯缺氧组 (P<0.01)。见表8。表8 细胞膜电容和电流密度的比较 (x±s，n=15)

　　3 讨论

　　宫颈癌是妇科三大恶性肿瘤之一。研究发现肿瘤内部乏氧不仅可引起肿瘤的发生、发展，还可引起肿瘤细胞放化疗抵抗，但其具体的缺氧调控机制仍不十分清楚，最近有关离子通道与低氧适应之间的关系引起了越来越多的注意[4]。离子通道中最常与细胞增殖和肿瘤相关的是钾通道;其中膜Eag1钾离子通道被认为与宫颈癌的相关性最为密切[5,6]。

　　Eag1钾离子通道是1969

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