GAPDH基因的PCR引物根据Primer 5.0设计，由上海生物工程技术服务有限公司合成。上游引物序列为5’CCACGTGACAAGCCCATGGGGCCCC，下游引物序列为3’GCAGCCTAGCCAGTCGGATTTGATG;扩增基因片段长度为490 bp。GAPDH基因作为内参照基因，上游引物序列为5’GGATTTGGTCGTATTGGG，下游引物序列为3’GCTCCTGGAAGATGGTGAT;扩增基因片段长度为211 bp，MMP2和GADPH基因的扩增参数为94 ℃ 3 min，循环条件为94 ℃ 45 s，56 ℃ 60 s，72 ℃ 90 s，共35个循环，最后72 ℃延伸10 min。
1.2.3 产物分析：取10 μl PCR扩增产物置于2%琼脂糖凝胶上进行电泳，相对分子质量为2 000的DNA标准，紫外透射仪下观察结果并拍照。利用VADAS 2.1系统(德国公司)进行图象扫描分析，计算目的基因mRNA的相对含量，即以MMP2/GADPH比值作为MMP2 mRNA的相对含量。所有标本的RTPCR扩增产物均观察到211 bp的GADPH基因扩增条带，证实逆转录所得cDNA的完整性和PCR反应成功。若观察到490 bp条带，表明MMP2基因表达阳性，无490 bp扩增条带则视为无MMP2基因表达。
1.3 统计学方法 应用SPSS10.0软件包进行t检验。
2 结果
2.1 MMP2 mRNA的表达 所有组织标本均检测到内参照基因GAPDH的稳定表达，证实逆转录所得产物cDNA的完整性和PCR反应的成功。MMP2 mRNA的RTPCR扩增片段长度为490 bp，GAPDH的扩增片段长度为211 bp。表1 各组子宫内膜组织中MMP2 mRNA的表达组别nMMP2 mRNAEM异位内膜500.6210±0.0870abEM在位内膜220.5360±0.0840cEM正常内膜200.5170±0.0760 注：a与正常内膜相比，P<0.01;b与EM在位内膜相比，P<0.05;c EM在位内膜与正常内膜相比，P>0.05
如表1所示，MMP2 mRNA 在50例EM异位内膜组织中均有表达，其相对表达量为(0.6210±0.0870)，明显高于正常子宫内膜组织(0.5170±0.0760)和在位内膜(0.5360±0.0840)，差异有显著性(t=4.7635，P<0.01;t=3.8583，P<0.05);而在EM在位内膜组织中的表达与正常子宫内膜组织的表达相比无显著差异(t=0.7766，P>0.05)。
2.2 MMP2 mRNA的表达与月经周期 在正常子宫内膜和EM在位内膜组织中MMP2 mRNA的表达受月经周期的影响呈现周期性变化，分泌期的表达均高于增生期;但二者在异位内膜组织中的表达则失去其周期性变化，分泌期的表达与增生期相比无显著差异。
2.3 内异症异位内膜组织MMP2 mRNA的表达与rAFS临床分期 50例内异症异位内膜组织标本MMP2 mRNA及蛋白的表达与rAFS临床分期没有相关性，各期内膜组织的MMP2 mRNA及蛋白的表达无显著性差异(P>0.05)，见表2。
表2 MMP2 mRNA与rAFS临床分期rAFS分期nMMP2 mRNA阳性Ⅰ～Ⅱ期250.6170±0.0900Ⅲ期170.6220±0.0810Ⅳ期80.6240±0.0850 本实验结果表明，异位内膜组织中MMP2的表达失去其在正常内膜中的周期性变化，异位内膜组织中MMP2 mRNA的表达明显增强。
3 讨论
3.1 MMP2与子宫内膜异位症 研究发现，异位内膜组织中虽然存在性激素受体，但与在位内膜相比其受体含量明显降低，并不随月经周期变化[2]，异位内膜对性激素有一定的敏感性，但缺乏对孕酮的正常反应。异位内膜失去月经的周期节律性，可能与异位内膜中孕激素受体相对或绝对缺乏有关。异位内膜组织对孕激素的敏感性下降，这可能是临床应用孕激素治疗内异症疗效欠佳的原因之一。本实验应用半定量逆转录聚合酶链反应技术(RTPCR)检测MMP2 mRNA在50例子宫内膜异位症异位内膜中的表达结果表明：异位内膜组织中MMP2 mRNA均有表达，其相对表达量为(0.6210±0.0870)，明显高于正常子宫内膜组织(0.5170±0.0760)和在位内膜(0.5360±0.0840)。
MMP2是MMPs中降解、变性Ⅳ型胶原明胶的主要成员，也
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