关于妊娠期肝内胆汁淤积症胎盘细胞凋亡与围生儿缺氧关系的研究

　　1 材料与方法

　　1.1 研究对象选自2001年12月至2002年12月在我院住院分娩的ICP患者30例，年龄29.2±4.63(23~39)岁，孕周37.9±1.65(32~41)周。ICP患者诊断标准按曹泽毅主编的《中华妇产科学》[3]中的相关标准。另选同期住院、分娩孕周与年龄相当的正常产妇27例为对照组。

　　1.2 方法

　　1.2.1 标本采集于胎盘娩出后5 min内，避开明显钙化或梗死区，取胎盘母面中央组织1 cm×1 cm×1 cm，固定、包埋，4 μm连续切片。

　　1.2.2 实验方法 bax及bcl-2基因表达的检测：采用免疫组织化学方法测定两组孕妇胎盘bax及bcl-2基因表达。鼠抗人bax单克隆抗体购自福州迈新公司;兔抗人bcl-2单克隆抗体购自北京中山公司。严格按照试剂盒说明进行。结果判定：用光学显微镜观察，以细胞浆内出现深棕黄色颗粒为阳性，无棕黄色颗粒为阴性，着色细胞数不超过30%为(+)，30%～60%为(++)，超过60%为(+++)。

　　1.3 统计学处理用χ2检验，秩和检验。

　　2 结果

　　2.1 两组围生儿缺氧发生情况 ICP组有2例新生儿窒息，13例胎儿窘迫，其中有2例为脐带缠绕所致，剔除这2例，比较两组围生儿缺氧 (包括胎儿窘迫和新生儿窒息)发生率，发现ICP组围生儿缺氧发生率明显高于对照组(见表1)，χ2=11.45，P<0.005，差异有极显著性。表1 两组围生儿缺氧发生率的比较

　　2.2 两组孕妇胎盘细胞bax及bcl-2基因表达的比较表2 两组胎盘bax及bcl-2表达水平的比较 两组孕妇胎盘均有bax及bcl-2的表达。Bcl-2主要表达于胎盘合体滋养细胞浆内，间质细胞及血管内皮细胞上均未见其表达。bax表达较广泛，合体滋养细胞、间质细胞及血管内皮细胞均有表达，但以合体滋养细胞表达强度最高。另外，bax表达水平高者，bcl-2表达水平较低，二者似呈负相关趋势。由表2可以看出，ICP组bax中度以上表达阳性19例(63.33%)，对照组5例(18.52%)，阳性表达率显著高于对照组(χ2=11.708，P<0.005);而bcl-2中度以上表达阳性18例(60%)，对照组24例(88.89%)，阳性表达率显著低于对照组(χ2=6.116，P<0.025)。进一步对两组资料进行基因表达水平分布的比较，发现ICP组bax高水平表达者居多，其整体表达水平显著高于对照组(秩和检验u=3.559, P<0.0005), 而bcl-2的表达水平显著低于对照组(u=3.461, P<0.0005)。由此推测，ICP组bax/bcl-2的表达比例高于对照组。

　　2.3 bax表达水平与围生儿缺氧的关系按合体滋养细胞上bax基因表达水平不同，将所有观察对象分为3组，bax表达水平为(-)和(+)者为第一组，bax表达水平为(++)、(+++)者分别为第二、三组。比较不同bax表达水平下围生儿缺氧的发生情况如表3所示，bax表达水平越高，发生缺氧的围生儿越多，提示围生儿缺氧的发生率有随bax表达水平升高的趋势。进一步分析发现，围生儿缺氧发生率在前两组之间无显著差异(χ2=0.301，P>0.05)，而第三组分别显著高于前两组(P<0.01)。表3 不同bax表达水平围生儿缺氧发生率的比较

　　3 讨 论

　　3.1 ICP孕妇的胎盘细胞凋亡细胞凋亡是一种普遍存在的生理现象，受凋亡相关基因的调节。bax和bcl-2是一对主要的细胞凋亡调控基因，bcl-2为抗凋亡蛋白而bax为促凋亡蛋白，二者表达比例决定细胞命运。如果bax基因占优势则使细胞对凋亡信号敏感性增强，易于发生细胞凋亡，反之，细胞存活。 正常妊娠各期胎盘细胞内都存在着凋亡调节因子，调节胎盘细胞的凋亡与增殖[4]。王冬梅等[5]证实，胎盘存在着bax和bcl-2基因的表达。我们的研究也得出同样的结果。正常妊娠时，随着妊娠的进展，胎盘细胞凋亡率逐渐增加[6]。细胞凋亡对胎盘的发育、生长及正常妊娠维持具有重要意义。妊娠晚期胎盘滋养细胞凋亡增多，在某种程度上有利于母儿间营养物质交换。但是，当胎盘凋亡增加所致的胎盘损伤超过了其代偿能力时，则出现胎盘功能减退。本研究结果显示，ICP组胎盘合体滋养细胞上bax基因表达阳性率显著高于对照组，而bcl-

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