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子宫内膜异位症患者外周血单核细胞的细胞因子测定 |
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en the levels of IL-6 and IL-8, TNF-α and NO in patients with endometriosis (P<0.01). Conclusions The immune function of peripheral mononuclear cell in patients with endometrosis was disordered. It may activate peripheral mononuclear cells to produce high levels of IL-6, IL-8, TNF-α and NO, which may take part in the pathogenesis of endometriosis.
【Key words】 Endometriosis Interleukin-6 Interleukin-8 Tumor necrosis factor Nitric oxide
近年来研究发现，外周血单核细胞与子宫内膜异位症（内异症）关系密切，被激活后持续分泌一系列细胞因子及生物活性物质，调控着其他免疫细胞的功能，影响内异症的发生和发展［1］。本研究采用酶联免疫吸附法，测定内异症患者外周血单核细胞培养的上清液中白细胞介素-6（IL-6）、白细胞介素-8（IL-8）和肿瘤坏死因子α（TNF-α）水平，镀铜镉还原（Griess）法测定NO水平，并探讨其变化及意义。
资料及方法
一、研究对象
收集1996年7月至1996年12月在我院行剖腹探查术后病理检查确诊为内异症的患者31例(内异症组)，按美国生育协会修正分期标准分为轻度组(Ⅰ、Ⅱ期，11例)，重度组(Ⅲ、Ⅳ期，20例)。对照组15例，为行输卵管结扎术和吻合术患者。3组年龄相似，采血前1个月内未患感染性疾病，未接受免疫抑制剂治疗，临床表现、胸部X线摄片及生化检查示无结核、肝炎、肿瘤及其他自身免疫性疾病。
二、标本采集及处理
采取外周静脉血6～8 ml，肝素抗凝，Hank液对倍稀释，缓慢加入盛有Ficoll-Hypague淋巴细胞分离液的离心管中，水平离心（2000 r/min）20分钟。吸出单核细胞层，用Hank液洗涤两次RPMI 1640液洗涤1次，每次离心去上清液。加入1 ml RPMI-1640完全培养基混匀，细胞计数，苔盼蓝染色，确定活细胞＞95％，取2×106个单核细胞加入24孔培养板，RPMI 1640完全培养液调整容量至1 ml，其中含脂多糖1 μg、植物血凝素200 μg。置于37℃、50％二氧化碳培养箱中孵育48小时。48小时后离心（1000 r/min）10分钟，收集上清液，于-70℃贮存待测。
三、测定方法
1. IL-6、IL-8及TNF-α测定：采用酶联免疫吸附法，试剂盒购自第四军医大学免疫学教研室，操作方法按药盒说明进行。
2. NO测定：NO极不稳定，在体内、体外均能很快生成亚硝酸基(NO-2)和硝酸基(NO-3)。因此，测定标本中的NO-2/NO-3作为衡量NO水平的指标，采用Griess法。
四、统计学处理
结果用±s表示，3组间比较采用方差分析与q检验。相关分析采用直线相关与回归分析。
结果
1.外周血单核细胞培养上清液中IL-6、IL-8、TNF-α及NO水平：内异症轻度组和重度组IL-6、IL-8、TNF-α及NO水平明显高于对照组(P<0.01)，轻度组和重度组间IL-6、IL-8、TNF-α及NO水平差异无显著性（P>0.05)，见表1。
表1 3组患者IL-6、IL-8、TNF-α及
NO水平比较(±s)
组别 例数 IL-6
(×10-3
ng/L) IL-8
(×10-3
ng/L) TNF-α
(×10-3
ng/L) NO-2/NO-3
(×10-3
nmol/L)
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