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妊娠相关血浆蛋白A的检测与唐氏综合征 |
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和标记示踪物不同。但是如果用提纯的PAPP-A来作标准和示踪物，在提纯或碘处理的过程中可引起分子结构改变或因同种异构化合物的存在而影响结果［13］。另外放射免疫法还存在试剂的稳定性和有效期短的问题。特别因为PAPP-A的高相对分子质量决定了碘标示踪具有特别高的活性，从而导致它比一般抗体更快衰变，而且这种方法对设备的要求特殊，使它在一般实验室开展受到限制。
2.酶联免疫法：为目前检测抗原抗体最常用的方法，检测灵敏度可达10-9/ml，仅次于放射免疫法。由于方法不断改进，使其灵敏度有了更大提高，近年来大有取代放射免疫之趋势。但酶标法本身受固相反应的制约，同时酶标显色的稳定性易受温度和酸碱度变化的影响，故酶标法并非理想的检测技术。
3．化学发光免疫法：灵敏度比放射免疫更高，可达10-15/ml，采用Y啶脂（acridinium ester）作为标记物的优点是低背景噪音、化学反应简单、快速而无须催化剂。
4．时间分辨荧光免疫（TrIFMA）、双标记时间分辨荧光免疫：由于它具备高敏感性和广泛的测量范围，出色的室间分析重复性，稳定可靠的商品化试剂，既没有放射免疫法中的试剂问题，也没有酶联免疫法受固相反应的限制及基质底物影响的问题，是一种适合在一般实验室推广开展的分析方法［14］。
四、影响PAPP-A测定特异性的因素
目前不论用哪种方法测定PAPP-A，所使用的抗体多为多克隆抗体。不尽人意的是这些抗体对PAPP-A的特异性并不强。实际上它们为PAPP-A/proMBP抗体。这些抗体是从以PAPP-A/proMBP的复合体形式存在的血清中分离获得的。更重要的原因是proMBP抗原是以超出PAPP-A/proMBP复合物的量存在于血中。这是由于proMBP除了与PAPP-A以复合体形式存在外，至少还有2种其它proMBP复合物的存在形式，他们分别是血管紧张素原复合体和补体3dg。这些复合体在妊娠唐氏综合症胎儿中的作用和水平均不清楚。因此，目前测定的这些所谓PAPP-A抗体，实际包括了不含PAPP-A的proMBP复合体。所以应用这样的抗体测出的PAPP-A的水平，由于交叉反应易出现较大的偏差［15］。
为了使PAPP-A测定结果真实反映其血中水平，尽可能的提高阳性检出率，这种免疫分析应该是特异性地针对PAPP-A的检测。不论它是游离的（假设存在这种形式），还是复合体形式，而不能是不含PAPP-A的其它血清成分。这对于目前主要是应用多克隆抗体的情况下显得更为重要。曾报道丹麦生产的PAPP-A抗体（A230），与人胎盘促乳素1、妊娠特殊β1糖蛋白、胎盘蛋白5、碱性磷酸酶、hCG和胆碱乙酰转移酶都不发生交叉反应［16，17］，后来Bueler等［18］及Bersiger等［19］证实,A230与SP1和半抗原球蛋白有交叉反应，Qin等［14］用斑点印迹法也证实A230与重组proMBP有反应，将母血用凝胶过滤后发现不论是高分子量的proMBP复合物,或半抗原球蛋白的交叉反应,均无法排除。人们为了克服A230产生的交叉反应，在测定时应用一种吸附程序，能够很好区别唐氏综合症妊娠和正常妊娠［19］。这种吸附程序在以前的研究中就证实了能增加多克隆PAPP-A抗体的特异性。但是像这样的程序要实现标准化是不容易的，而且操作费时，难于在一般实验室普遍推广应用。
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