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卵巢癌抗独特型抗体6B11scFv和人粒细胞 |
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杨飞雪 钱和年 黄华梁 冯捷 崔恒
【摘要】 目的 构建和表达模拟人卵巢癌抗原的抗独特型单链抗体6B11scFv 和人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(hGM-CSF)的融合蛋白,以提高抗独特型抗体的免疫原性,为进一步用于卵巢癌的免疫治疗提供基础。方法 采用基因工程技术，用编码连接肽的DNA连接6B11scFv和hGM-CSF cDNA，并对大肠杆菌用温度进行诱导表达；采用蛋白免疫吸附印迹法，对表达的蛋白进行活性测定。结果 表达的蛋白能分别与6B11的初始抗体和小鼠抗hGM-CSF单克隆抗体特异结合。结论 表达的融合蛋白保留了6B11scFv和hGM-CSF两种成分的活性，增强了6B11scFv的免疫原性。
【关键词】 重组融合蛋白质类 抗体，抗独特型 粒细胞巨噬细胞集落刺激因子 卵巢肿瘤
The Construction and Expression of 6B11scFv Anti-idiotypic Antibody and Human Granulocyte-macrophage -colony Stimulating Factor in Escherichia Coli
YANG Feixue, QIAN Henian, HUANG Hualiang, et al.
Gynecologic Oncology Center, People′s Hospital, Bejing Medical University, Beijing 100034
【Abstract】 Objective To enhance the antigenicity of an anti-idiotypic single chain antibody 6B11 mimicking ovarian cancer antigen. Methods Using DNA recombinant technique, a recombinant fusion protein expression vector was constructed. This vector linked 6B11scFv cDNA and human GM-CSF with a linker. Protein productions were induced with the temperature change in E. Coli and analyzed with western blot. Results The expressed fusion protein can be reacted with both anti-human antibody and COC166-9(AB1 of 6B11). Conclusion The recombinant fusion protein keeps the activities of both components and may be used as tumor vaccine for ovarian cancer.
【Key words】 Recombinant fusion proteins Antibodies, anti-idiotypic Granulocyte-macrophage colony-stimulating factor Ovarian neoplasms
肿瘤的主动免疫治疗，越来越多的受到关注。但目前对肿瘤特异性抗原了解的并不多，而机体对肿瘤相关抗原往往处于免疫耐受状态。抗独特型抗体能够模拟外来抗原，并且能够打破机体的免疫耐受，作为肿瘤疫苗，已有用于肿瘤治疗的报道，并取得了良好疗效［1-3］，具有良好的应用前景。但由于抗独特型抗体只模拟抗原的单个表位，引起的免疫反应容量小，免疫原性弱。而且目前常用的单克隆抗体是鼠源性，其缺点是由于种属特异性，反复用于人体可导致产生人抗鼠抗体，严重时可出现类似血清病样反应，限制了其在临床的应用。北京医科大学人民医院妇科肿瘤中心(妇科肿瘤中心)制备了模拟卵巢浆液性乳头状囊腺癌抗原的抗独特型抗体6B11和6B11单链抗体6B11scFv［4,5］。为了进一步提高单链抗体表达原，我们构建了单链抗体和人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(hGM-CSF)融合蛋白，以增强6B11scFv的免疫原性,为用作肿瘤疫苗提供基础。
材料和方法
一、质粒和菌株
质粒pCANTAB5E-6B11scFv为妇科肿瘤[1] [2] 下一页
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