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孕妇血中富集胎儿细胞技术的进展 |
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均能认识其表面抗原的抗体340，在早孕期母血中分离出滋养细胞，同时加用3倍密度位差分层离心法（triple gradient），表面涂有CD71的磁珠继以Mini磁激活细胞拣选柱（mini magnetically activated cell sorting），可分离出胎儿NRBC，男性胎儿诊断正确率可提高至83％，女性胎儿则为100％。因而，近年来许多学者都采用分离胎儿NRBC来进行产前诊断。
三、分子生物学胎儿细胞富集技术
在母亲末梢血中，胎儿NRBC为数甚微，与母亲有核红细胞之比为1∶1×107～1∶1×108［10］，也有报道为1∶4.75×106～1∶6×107［16］。因此，要取得足量胎儿NRBC进行产前诊断分析，是一项艰难的工作。
1. 流量细胞仪（flow cytometry）：流量细胞仪一直被应用于富集胎儿细胞，目前，以方法改良为多参数测定法［17］，包括血小板大小，细胞颗粒程度，抗CD71阳性，以及抗GPA阳性等4项参数，对富集的胎儿细胞进行二次PCR扩增，然后再以原位杂交及特异性探针检测。Price等［17］通过多参数流量细胞仪测定了18个样本的胎儿NRBC，进行PCR扩增，单拷贝Y-特异DNA序列，12例男性胎儿100％确诊，6例女性胎儿5例确诊，总确诊率为94％（17/18）。Adkison等［18］对50例孕11～16周的母血中胎儿细胞，以寡核苷酸原始质（oligonucleotide primer）——YCH1及YCH2，检认其248bp的Y染色体特异片段，在30个周期的扩增后，确认了19例男婴，在第2次30个周期扩增后，又确认了3例男婴，从常规染色体核型分析中得出24例为男婴，故1次PCR扩增确认成功率为79.2％（19/24），而第1次加第2次为91.7％（22/24），无假阳性。
2. 荧光激活细胞拣选法（fluores- cence-activated cell sorting， FACS）和磁激活细胞拣选法（magnetically-activated cell sorting， MACS）：母血中胎儿细胞数目少，PCR可扩增细胞数，但易被母血细胞污染，从而导致假阳性结果。Vaccaro等［19］提出，在胎儿细胞表面涂以荧光免疫染色的抗原——荧光FACS，应用对其高度特异性的单克隆抗体，富集胎儿细胞，这样，可避免应用PCR而发生母细胞污染的可能性。
磁激活细胞拣选法［19］是近年来发展起来的一种拣选细胞的方法。磁分离系统包括：(1)磁化颗粒或磁化珠，(2)提供磁力的磁铁。磁化颗粒或磁化珠又分两类：非磁化物如：乳胶、纤维素或白蛋白，内封嵌有少量磁性物质（氧化铁）；磁性物质主要为氧化铁。
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