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外周血PSA PSA mRNA联合检测在前列腺癌诊断中的临床应用 |
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用Trizal试剂提取总RNA，提取过程按其说明书操作。提取产物用12%甲醛变性琼脂糖凝胶电泳鉴定总RNA质量。紫外分光光度计下测OD260、OD280，测定RNA纯度和浓度。取OD260/OD280值在18～20范围内的标本进行逆转录。所有实验中的塑料制品及实验用具均经01%DEPC水处理后高压灭菌。
17 RTPCR
取1 μg总RNA进行逆转录反应；取逆转录产物2 μl和PSA上下游外、内引物各1 μl，使用20 μl反应体系进行2次PCR（2次PCR反应体系相同），同时扩增PSA、βactin和阴性对照cDNA（由健康女性外周血白细胞RNA逆转录获得）。具体循环参数为：94℃ 4 min，94℃ 45 s，55℃ 30 s，72℃ 45 s；25个循环之后，72℃延伸10 min。PCR扩增产物经1%琼脂糖凝胶电泳后用EB染色，经凝胶成像系统拍照。
18 血清PSA的检测
PSA定量检测由专人严格按说明书进行操作。
19 统计学处理
应用SPSS100软件对数据进行处理，采用t检验、χ2检验。
2 结果
21 PCa组、BPH组、阴性对照组血清PSA检测结果 见表1。表1 PCa组、BPH组、阴性对照组血清PSA的检测结果（略）
22 PCa组血清PSA检测结果与临床参数的关系
见表2。表2 PCa组血清PSA与
临床参数的关系(略)
PCa组血清PSA的水平在3个年龄分组中总体比较无显著性差异（P＞005），在3个临床分期中总体比较有显著性差异（P＜005），在3种Gleason评分中总体比较有显著性差异（P＜005）。
23 PCa组、BPH组、阴性对照组外周血PSA mRNA表达情况
PCa病人外周血标本经PSA巢式PCR外、内引物两次扩增后，产物在同一琼脂糖上得到PSA的RTPCR特异性条带（图1）。PSA经巢式PCR扩增最终可得到特异性条带（图2）。PCa组、BPH组、阴性对照组外周血PSA mRNA表达情况见表3。表3 PCa组、BPH组、阴性对照组外周血PSA mRNA表达情况（略）
PCa组PSA mRNA阳性表达明显高于BPH组，差异有显著性意义（P＜005）。
24 PCa组外周血PSA mRNA表达情况与临床参数的关系
见表4。表4 PCa组外周血PSA mRNA表达情况与临床参数的关系（略）
PSA mRNA表达情况在3个年龄分组中总体比较差异无显著性（P＞005），在3种Gleason评分中总体比较无显著性差异（P＞005），在3种临床分期中总体比较差异有显著性（P＜005），在是否内分泌治疗分组中总体比较差上一页 [1] [2] [3] [4] [5] 下一页
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