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先天性心脏病合并肺动脉高压一氧化氮合酶mRNA表达及临床意义 |
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55℃引物退火2 min，72℃延伸3 min，共进行35个周期. 首次循环前先在94℃变性2 min，最后一次循环后在72℃延伸10 min. NOS和β2MG 在同一管内扩增，取10 μL PCR产物在2 g/L琼脂糖凝胶上进行电泳、照相. 以图像分析系统对电泳结果照片上NOS,β2MG特异性扩增产物的电泳带密度扫描定量，然后计算出NOS和β2MG密度之比值，确定NOS mRNA的相对表达水平.
统计学处理： 用SPSS6.0统计软件包作统计处理，实验数据用x±s表示. 先进行三组间方差齐性检验，在方差齐的基础上作方差分析，若有显著差异，则进一步做三组间两两比较的q检验；对NOS mRNA表达与病理分级进行相关分析,如方差不齐采用秩和检验,P<0.05为有统计学差异.
2结果
2.1肺组织血管的病理学分级17例肺高压患者肺组织血管病理改变程度参照 Healthy等［3］的病理分级标准，其中血管形态正常5例，1级改变6例，2级改变4例，3级改变2例. 组织学变化在肌型动脉和细动脉较弹力型动脉明显. 中重度肺高压病例的肺血管改变也明显比轻度肺高压病例的改变重.
2.2RTPCR检测用RTPCR方法检测无肺高压组、轻度肺高压组、中重度肺高压组肺组织标本中NOS mRNA相对表达水平，电泳结果见图1. 中重度肺动脉高压组NOS mRNA表达水平较非肺高压组和轻度肺高压组NOS mRNA表达显著降低（P<0.05），轻度肺高压组与非肺高压组NOS mRNA表达水平无差别［(0.86±0.04) vs (0.92±0.03, P>0.05］.
1,16: 标记物; 6~8: 轻度肺高压样本; 2~5: 无肺高压样本; 9~12: 中重度肺高压样本; 13: 内参照; 14: 样本; 15: 阴性对照物.
图1RTPCR电泳结果
2.3肺高压组肺组织NOS mRNA表达与肺血管病理分级的相关分析结果显示肺组织NOS mRNA表达水平与肺血管病理分级呈明显负相关（r=-0.833, P<0.
01）.
3讨论
本研究采用RTPCR分子生物学技术，检测先天性心脏病无肺高压、轻度肺高压和中重度肺高压患者肺组织标本中NOS mRNA的表达，结果表明，NOS mRNA表达水平与肺动脉高压的严重程度密切相关， 即肺高压程度越重， 肺血管病变越重，NOS mRNA表达下降越明显. 中重度肺高压患者NOS mRNA表达较无肺高压和轻度肺高压患者明显减低(P<0.05)， 而在轻度肺高压患者中NOS mRNA表达下降不明显(P>0.05)，说明NOS mRNA表达下降是继发于肺血管内皮细胞受损之后，且可能参与肺动脉高压的发生、发展过程.
无肺高压者，在肺血流量增多时，由于血管壁切变应力增加，可剌激肺血管内皮细胞分泌NO［4］， 以扩张肺血管适应血流动力学的变化，即机体处于一种代偿状态. 但切变应力、高动力循环本身，特别是涡流及涡流切变应力对血管内皮有损伤作用［5］ ， 不引起NOS mRNA表达增加，或不引起NO释放增加. 故随病程进展，一旦这种代偿机制受损，则表现为肺动脉高压状态，并随肺血管病变的严重程度而加重. 本研究表明，中重度肺高压NOS mRNA 表达水平显著降低，而轻度肺高压时NOS mRNA表达下降不明显. Nakamura等［6］发现，先天性心脏病于肺高压前期(有肺血增多，但无肺高压)，乙酰胆碱舒张血管的作用消失， 而保留硝普钠对血管的舒张作用， 即乙酰胆碱不能再增加NO的分泌，当出现肺血管病变时，对硝普钠和乙酰胆碱的舒张作用显著减弱，因此认为这种早期舒张功能受损是肺血管病变的一个重要特征.
Villanueva等［7］通过检测新生儿持续肺高压患儿肺组织NOS mRNA,其表达下降. 本研究与此结果相符. 另有研究应用外源性NO吸入治疗急、慢性肺动脉高压，取得良好效果［8］， 也支持在肺高压时内源性NO合成减少或相对不足.
先天性心脏病合并肺动脉高压NOS mRNA 表达减低的原因： ① 肺血流量增多，血管壁切变应力增加，特别是涡流损伤了血管内皮细胞的形态和功能，即内皮受损后继发引起NOS上一页 [1] [2] [3] [4] [5] 下一页
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