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人类冻融胚胎移植技术的临床应用 |
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的不孕症患者63例，80个冻融胚胎移植治疗周期，80个冻融胚胎移植治疗周期中来自IVF 71个周期， ICSI 9个周期，报道如下.
1材料和方法
1.1材料
冷冻胚胎来源： 促超排卵、取卵、体外受精及胚胎培养，均按本中心操作常规进行，于取卵术后48~72 h将2~3个新鲜胚胎移植入子宫腔. 剩余的存活胚胎（Fig 1A），采用慢速法冷冻保存，快速法解冻复苏［1］.
1.2方法
1.2.1胚胎冷冻冷冻液CryoPBS： 含25 g/L人血清白蛋白的磷酸盐缓冲液（PBS+25 g/L HAS）； FS1: 1.5 mol/L丙二醇+CryoPBS; FS2: 1.5 mol/L丙二醇+0.1 mol/L蔗糖+CryoPBS. 冷冻液及解冻液均来自瑞典Vitrolife公司. 在四孔培养皿1, 2, 3, 4号孔中分别加入1 mL CryoPBS, FS1, FS2, FS2，室温平衡. 将胚胎放入CryoPBS 2~5 min后，放入FS1保持10 min，再将胚胎放入FS2后装入麦管并封口. 将麦管放入冷冻仪（Planer Kryo3601.7，英国）开始冷冻程序：从18℃起，以2℃/min逐渐降温至-7℃，此时用液氮浸透的棉签在麦管接近棉塞的部位进行植冰（seeding），然后以0.3℃/min缓慢降温到-30℃,再快速降温至-100℃程序结束，迅速取出麦管，放入液氮罐（-196℃）保存.
1.2.2胚胎解冻解冻液TS1: 1.0 mol/L丙二醇+0.2 mol/L蔗糖+CryoPBS; TS2: 0.5 mol/L丙二醇+0.2 mol/L蔗糖+CryoPBS; TS3: 0.2 mol/L蔗糖+CryoPBS. 将解冻液TS1, TS2, TS3及CryoPBS分别按顺序加入四孔培养皿中，从液氮罐中拿出麦管，室温下解冻30 s后，放进30℃水浴中30 s. 剪去一端或拔掉塞子，接上麦管操作器，然后再剪去另一端，小心地将胚胎吹入TS1中，在TS1中孵育5 min，移入TS2 5 min，再移入TS3中5~10 min，将胚胎放进CryoPBS， 37℃下保持10 min. 最后将胚胎放入培养液中培养2~12 h，检查胚胎存活率并记录胚胎形态，有半数以上的分裂球存活的胚胎可以移植（Fig 1B）.
1.2.3冻融胚胎移植（FET）时机选择① 自然周期（natural cycles）： 规律月经有排卵的患者一般选择在自然周期进行FET. 在预计排卵日前3~4 d行黄体生成素（LH）测定，同时B超监测卵泡发育和排卵，排卵后2~3 d或LH峰出现4 d后行FET.② 激素替代周期（hormone replace treatment）： 雌激素水平低下的无排卵的患者在激素替代周期内进行FET. 从月经周期或撤退性出血的第2~3日起，戊酸雌二醇2~8 mg/d, po, 10~14 d后B超监测子宫内膜厚度，当子宫内膜厚度≥8 mm时，开始加用黄体酮60~100 mg/d，给予黄体酮4 d后，解冻胚胎并FET. ③ 促排卵周期（ovary stimulation cycles）： 月经稀发或月经不规律的患者，可给予克罗米芬（CC）或人绝经尿促性腺激素（HMG）促排卵治疗，阴道B超监测卵泡发育，当主导卵泡直径≥18 mm时给予hCG 5~10 kU, im. 排卵后2~3 d或注射HCG后84 h行FET.
1.2.4妊娠监测于移植后15 d查尿或血HCG，若阳性则于停经7 wk行B超检查，见孕囊及原始心管搏动诊断为临床妊娠，继续随访至妊娠结束.
统计学处理： 年龄、不孕时间、移植胚胎数等定量资料以x±s表示；对计数资料进行χ2检验；用SPSS12.0软件进行多因素Logistic回归分析.
2结果
2.1一般概况与结局80个FET治疗周期，年龄23~36(31.4±3.0)岁，不孕时间1~15(6.3±3.1) a. 解冻胚胎392个，复苏胚胎269个，胚胎复苏率为68.62%. 每周期移植胚胎数1~3(2.6±0.6)个. 19例临床妊娠，临床妊娠率23.75%（19/80）；流产4例，流产率21.05%（4/19）；多胎5例（均为双胎），多胎率26.32%（5/19）. 已分娩6例，出生婴儿8（男5，女3）名，体质量(2523.8±497.7)g，随访至200412均发育正常，身体健康. 9例继续妊娠中.
2.2年龄与临床妊娠率的关系将病历资料划分为2个年龄段，比较临床妊娠率，两组间无显著性差异（χ2=0.84, P>0.05），<30上一页 [1] [2] [3] [4] 下一页
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