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肺癌及癌旁组织EGR 1基因表达及与临床病理的关系 |
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or;gene expression
原发性支气管肺癌（又称肺癌）是我国成年男性中最常见的恶性肿瘤之一。肺癌的发生发展是个逐渐演化的过程,该过程涉及到众多原癌基因的激活和抑癌基因的失活。早期生长反应基因（EGR-1）是一种抑癌基因，它的异常与许多癌症的发生发展密切相关［1］。抑制细胞增殖、诱导肿瘤细胞凋亡是抑癌基因发挥其生物学效应的重要机制之一。抑癌基因EGR-1的研究近年渐受重视。有关肺癌与抑癌基因EGR-1的研究少有报道。本文通过对肺癌、癌旁组织及正常肺组织中EGR-1基因表达情况的研究，探讨肺癌演化过程中EGR-1 mRNA表达情况及其与临床病理生理特征的关系，从分子水平上寻找肺癌发生发展的理论依据，指导临床治疗。
1 资料与方法
1.1 一般资料 收集我院胸外科2003年1月1日~2004年9月30日肺癌住院手术患者30例，男22例，女8例。年龄30~79岁，中位年龄58岁。其中中央型肺癌11例，周围型肺癌19例。全部病例术前均未接受过化疗和放疗，术后均经病理证实为非小细胞肺癌。并收集20例正常肺组织（来源于自发性气胸肺大疱切除患者的肺组织）为对照组。每例肺癌标本分别切取癌灶、癌旁组织各一小块，对照组取正常肺组织一小块，标记后-180℃保存。
1.2 试剂及方法 组织总RNA抽提试剂盒购于上海华舜生物工程有限公司，DL-2000Marker购于Takara公司，一步法RT-PCR试剂盒购于大连宝生物工程公司。肺癌组织及癌旁组织为试验组，正常肺组织为对照组。应用RT-PCR测定EGR-1 mRNA表达：（1）细胞总RNA提取和鉴定：组织/细胞总RNA提取按试剂盒说明书进行操作，紫外分光光度计测定RNA纯度及含量，各样本OD260/OD280均在1.7~2.0。（2）引物合成：根据参考文献提供的EGR-1、β-actin的cDNA序列［2］由北京赛百盛基因技术公司合成，纯化。引物序列如下：EGR-1 sense 5-TGC AGA TCT TGA CCC GTTC-3 Antisense 5-GGA GAT GGT GCT GAG GACG-3；产物长度：489bp；β-actin sense 5-CCA AGG CCA
ACC GCG AGA G-3 Antisense 5-AGG GTA CAT GGT GGT GCC GC-3；产物长度：587bp。（3）RT-PCR反应：按一步法RT-PCR试剂盒推荐条件操作，以β-actin为内参照，反应条件为94℃变性1min，57℃退火2min，72℃延伸2min，共行30次循环。（4）电泳：2%琼脂糖凝胶电泳，以溴乙啶显色后在GDS-8000凝胶成像系统上用Grab-Ⅱ软件摄取电泳图像，再用Gelworks ID分析软件进行分析，以各目的片段与β-actin的像素值之比进行半定量分析。
1.3 统计学方法 采用t检验和方差分析处理相关数据。
2 结果
2.1 不同肺组织中EGR-1 mRNA表达情况 RT-PCR检测发现30例肺癌组织及癌旁组织中EGR-1 mRNA阳性表达分别为12例和18例，其中20例正常肺组织EGR-1 mRNA阳性表达17例，且表达量最高，在癌旁组织表达次之，在癌灶中心组织表达最低，如图1所示。两两比较差异有显著性（P＜0.05或P＜0.01），结果见表1。
图1 不同肺组织中EGR-1 cDNA表达情况 （略）
表1 不同肺组织中EGR-1 mRNA表达水平比较（略）
注：与癌组织组比较，*P＜0.01；与癌旁组织组比较，△P＜0.05
2.2 肺癌组织中EGR-1 mRNA表达与肺癌临床病理生理特征的关系
2.2.1 与年龄、性别的关系 RT-PCR检测发现7例<50岁肺癌患者EGR-1 mRNA阳性表达为1例，23例＞50岁肺癌患者EGR-1 mRNA阳性表达为11例；在EGR-1 mRNA表达阳性患者中不同年龄及性别肺癌组织中EGR-1 mRNA表达水平差异无显著性，P>0.05。见表2。
2.2.2 与原发肿瘤部位、区域淋巴结阳性状态的关系 在30例EGR-1 mRNA表达阳性患者中，区域淋巴结阳性的7例中肺癌组织EGR-1 mRNA表达水平显著低于不伴有淋巴结转移者（P<0.05）。中央型和周围型肺癌上一页 [1] [2] [3] 下一页
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