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阴沟肠杆菌高产AmpC酶和ESBLs的检测及其耐药性研究 |
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ome；the best antibiotics for treatment of infections caused by ESBLsproducing strains is Imipenem,followed by Piperacillin／Tazobactam and Cefoperazone／Sulbatam；hyperproduction of the AmpC βlactamase and／or ESBLs had been documented as a prevalent mechanism of βlactam resistance in Enterobacter cloacae．
Key words:Enterobacter Cloacae；AmpC enzyme;Extendedspectrum βlactamases(ESBLs);The modified threedimensional testing；Antimicribial Resistance
近年来由于三代头孢菌素在临床上的广泛应用，导致细菌耐药性的不断增加。有关AmpC酶［1］和ESBLs［2］的问题是目前肠杆菌科细菌感染面临的最大问题，其中最具代表性的是阴沟肠杆菌，目前国内外对阴沟肠杆菌ESBLs和AmpC酶的检测方法以及如何治疗由高产AmpC酶和ESBLs的阴沟肠杆菌引起的感染都无明确的定论［3］，而且由于不同地区、不同医院抗生素的使用及其耐药趋势存在差异，本研究以阴沟肠杆菌为对象，调查本地区AmpC酶和ESBLs在阴沟肠杆菌的流行情况，明确本地区阴沟肠杆菌的耐药现状，阐明其耐药表型与耐药基因的表达关系，探讨阴沟肠杆菌临床分离株对β内酰胺类抗生素耐药机制。
1 方法
1．1 细菌的鉴定及收集 收集2004年1月至2005年6月间西安交通大学第一附属医院、第二附属医院、陕西省人民医院、西京医院、西安市中心医院五家医院细菌室临床送检标本中培养鉴定的阴沟肠杆菌，细菌的鉴定采用全自动微生物分析仪Vitek-60或VitekⅡ。
1．2 药敏试验
1.2.1 方法 采用琼脂纸片扩散(K-B法)，药敏试验按NCCLS 2001年标准操作和结果判读(S、I、R)，药敏纸片的抑菌圈直径用游标卡尺测量并记录［4］。
1．2．2 药敏纸片 头孢唑啉(KZ，30 μg)，头孢克罗(CEC，30 μg)，头孢呋新(CXM，30 μg)，头孢曲松(CRO，30 μg)，头孢噻肟(CTX，30 μg)，头孢他啶(CAZ，30 μg)，氨曲南(ATM，30 μg)，头孢西丁(FOX，30 μg)，头孢吡肟(FEP，30 μg)，亚胺培南(IMP，10 μg)，哌拉西林／三唑巴坦(TZP，100 μg/10 μg)，头孢哌酮／舒巴坦(SCF，75 μg／10 μg)，替卡西林／克拉维酸(TIM，75 μg／10 μg)，环丙沙星(CIP，5 μg)，左旋氧氟沙星(LEV，5 μg)，阿米卡星(AK，30 μg)，头孢他啶／克拉维酸(CD02,30 μg／10 μg)、头孢噻肟／克拉维酸(CD03，30 μg／10 μg)，纸片为英国OXOID公司产品。
1．2．3 质控菌株 大肠埃希菌ATCC 25922、大肠埃希菌ATCC 35218(仅作为TIM、TZP和SCF三种药敏纸片的质控)、肺炎克雷伯菌ATCC 700603(仅作为产ESBLs阳性的质控菌株)，阴沟肠杆菌029M(仅作为高产AmpC酶的阳性菌株)。每周用质控菌株进行质量控制，所有药敏结果按NCCLS的标准进行判定。
1．3 改良三维实验进行阴沟肠杆菌AmpC和ESBLs的检测
1．3.1 β内酰胺酶(BLA)酶提取物制备［5］ 将1个菌落种入5 ml胰蛋白大豆汤中，35 ℃摇床过夜，4 ℃ 4 000 r／min离心20 min，弃上清液，沉淀物放-80 ℃冻融，反复5次。加入1.5 ml 0．01 mol磷酸缓冲液(PH7．0)混匀，4 ℃ 12 000 r/min离心20 min，取部分上清液，经MH琼脂平板常规细菌培养阴性后，于-20 ℃保存备用。
1．3．2 头孢西丁FOX三维试验检测AmpC酶［6］ 在MH琼脂平板上按纸片扩散法标准涂布0．5麦氏浊度的大肠埃希菌(ATCC 25922)，平板中央贴一张30 μg的FOX纸片，距纸片边缘5 mm处用无菌刀片向平板边缘挖一放射状沟槽，由纸片端向平板上一页 [1] [2] [3] [4] [5] [6] 下一页
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