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甲状腺癌组织中EG 1基因的表达与预后的相关研究 |
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随访截止日期为2007年5月，中位随访时间为70个月（8～87个月）。随访期间死于其他原因、失访或研究截止仍生存者，均记为删失数据，共7例。取15例良性甲状腺疾病（结节性甲状腺肿）病例作为对照。所有病例均获取其甲状腺组织石蜡包埋块。
考虑患者发病年龄和肿瘤大小对患者预后影响，参照Shaha 等［３］的研究结果，发病年龄以45岁为界，肿瘤大小以4 cm为界，将52例甲状腺癌患者分组。
甲状腺癌的组织学分级参照SAG评分标准［4］。SAG评分0分为Ⅰ级，1分为Ⅱ 级，2～3分为Ⅲ级。甲状腺癌的肿瘤分期参照2002年美国癌症联合会（UICC）甲状腺癌最新分期标准［５］ 。
使用AMES［６］, AGES［７］和MACIS［８］评分系统评价预后。AMES评分高危组23例，低危组29例；AGES评分以5为界，高危组（≥ 5分）21例和低危组（<5分）31例；MACIS评分以7为界，高危组（≥7分）17例，低危组（<7分）35例。各评分系统行单因素生存分析。
1.2 RT-PCR检测EG-1基因的表达
1.2.1 RNA 提取 选用Ambion公司Paraffin Block RNA Isolation kit试剂盒，参照文献 ［９-１０］提取甲状腺组织中EG-1 mRNA，紫外可见光分光光度计测定含量。
1.2.2 目的RNA 扩增 应用上海生工逆转录试剂盒（SK2028），配成20μL反应体系，RNA模板12μL，转录合成cDNA。选择β-actin 做内参照进行扩增，引物序列为:正义链5 -ACACTGTGCCCATCTACGAGGGG-3 ，反义链5 -ATGAGTGAGTTGAAGGTAGTTTCGTGGAT-3 （上海生工合成）。扩增片段366 bp。目的基因EG-1 扩增的引物序列为，上游引物5’-TGCATCTCTGGTGAGTCAGG-3’，下游引物5 ’-TGCCTCAGCTTTGTCAAGTG-3’（上海生工合成），扩增片段246 bp。RT-PCR 扩增选用Biometra PCR 仪，扩增体系为20 μL，其中模板2 μL。
1.2.3 结果判定 RT-PCR 后1.5%琼脂糖凝胶行电泳, 紫外可见光分光光度计检测EG-1扩增产物为246 bp的特异性条带。
1.3 统计学分析 采用SPSS 10.0统计分析软件，良恶性甲状腺组织中EG-1基因表达差异比较采用四格表资料的卡方检验，单因素生存分析应用Kaplan-Meier 生存曲线分布的时序检验，多因素生存分析应用Cox 比例风险回归模型。P≤0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 EG-1基因在甲状腺组织中的表达 52例甲状腺癌组织中，38例检测到EG-1 mRNA，表达率73.08%。15例甲状腺良性结节中，4例检测到EG-1基因的表达，表达率为26.67%,两者差异有统计学意义，χ2=10.720，P <0.05（图1）。
2.2 单因素生存分析 甲状腺癌患者EG-1基因表达组（38例）和未表达组（14例）总生存曲线分析存在差异，P=0.025（图2）。年龄、淋巴结转移、肿瘤分期、病理类型的不同组别间总生存曲线比较差异均有统计学意义，性别间总生存曲线比较差异无统计学意义（表1）。
2.3 多因素生存分析 EG-1基因表达、年龄、淋巴结转移、肿瘤分期、病理类型均为预测甲状腺癌生存率的独立预后因素，其中 EG-1基因表达组死亡风险与未表达组相比明显增高,RR=4.947，P=0.008（表2）。
2.4 评分系统评分与生存分析 对AMES、AGES 和MACIS的高危组与低危组生存曲线行单因素生存分析，P值分别为0.001,0.044和<0.001，差异均有统计学意义。
3 讨论
甲状腺癌的发生约占全身恶性肿瘤的1%,在神经内分泌系统恶性肿瘤中占90%以上。据统计大约5%-10%的人在一生中可能会发现具有临床意义的甲状腺结节［９］。在所有恶性肿瘤中，甲状腺上一页 [1] [2] [3] [4] 下一页
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