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探讨改良线栓对局灶脑缺血模型制备的影响 |
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制备大鼠局灶脑缺血模型的方法较多，但以线拴法应用最广. 线栓法制备局灶脑缺血模型目前还存在某些不足，如线栓插入困难，栓塞成功率不高，梗塞体积不稳定等［3］. 这与线栓直径、弧度以及术中颈总动脉血流阻断时间等因素密切相关.本研究重在对线栓弧度进行改良，观察改良线栓对局灶脑缺血模型的影响.
1 材料和方法
1.1 材料 健康雄性Wistar大鼠40只，体质量220～250 g，8～10 wk龄，购自重庆医科大学实验动物中心，适应性喂养1 wk后，随机分为常规线栓组和改良线栓组，每组20只.
选用“贵花田”牌鱼线，直径0.23～0.26 mm，参照Ma等［4］的方法略加修改，制备改良线栓. 先将鱼线剪成3 cm长的小段，60～70℃加热2 h将鱼线小段塑呈弧形，弧形外切角为30°时最佳，可确保线栓弧度与大鼠颈内动脉走行一致. 自然冷却后，头端约5 mm涂上聚胺酯，用油性记号笔在线栓头端和距头端约2 cm处作上标记，以方便植入线栓时调整线栓方向，了解线栓进入血管的长度. 制备常规线栓时，除不进行加热塑型外，其余步骤相同.制备好的线栓头端向上，垂直插在海绵垫上，风干，紫外线消毒后备用. 使用前在生理盐水配制的肝素钠(6250 u/mL)溶液中浸渍可用.
1.2 方法 参照Longa等［5］和罗勇等［6］报道的方法，采用经颈内动脉线栓法制备大鼠右侧MCAO致局灶性永久性脑缺血模型. 35 g/L水合氯醛腹腔注射麻醉大鼠，仰卧位固定，颈前区备皮、消毒. 取颈正中切口逐层切开皮肤及皮下组织，分离胸锁乳突肌，切断二腹肌前腹，暴露右侧颈总动脉(common carotid artery，CCA)，颈内动脉(internal carotid artery，ICA)和颈外动脉(external carotid artery，ECA)，探查颈外动脉在颈部发出第一分支（甲状颈干）处，在其远心端（偏嘴侧）约0.2 cm处结扎并切断ECA，确保ECA残端长度不短于0.5 cm；游离、凝闭并切断ECA与ICA之间的交通支. 用蛙心夹暂时阻断CCA及ICA血流，用11号手术尖刀于ECA残端作一纵行小切口，将线栓从右侧ECA残端插入ICA；轻轻牵拉EC
A残端，使其与ICA成一条直线，调整线栓角度，使改良线栓弧度水平向外，与颈前正中线呈45°水平向外的夹角，移去夹闭ICA的蛙心夹，轻轻将线栓送入颅内. 从CCA分叉处送入ICA约1.9～2.1 cm时通常可遇阻力，且大鼠呼吸、心跳突然加快，部分大鼠尿失禁，借此可作为大脑中动脉起始处栓塞成功的标志. 若不能顺利将线栓送入颅内，可再度调整线栓与ICA的角度，或再夹闭ICA更换线栓；若线栓插入过程中，线栓进入血管内的长度小于1.5 cm即遇阻力（通常为 1 cm左右），同时大鼠出现轻微的右侧面肌抽动，提示线栓误入翼腭动脉（pterygopalatine artery，PPA），须拔线栓至ECA残端，再度调整线栓角度，重新插入. 栓塞成功后，用丝线结扎ECA残端，移去夹闭CCA的蛙心夹，观察无活动性出血后关闭切口.
1.2.1 神经行为学评分 造模后3 h，进行Longa法神经功能缺损评分［5］，评判模型成功与否. 评分为1～4分者为成功模型. 造模后12 h，再根据Longa评分综合评定各组大鼠损伤程度，并进行统计分析.
1.2.2 磁共振（MRI）检查和红四氮唑(TTC)染色 采用TOSHIBA VISART 1.5T超导磁共振成像机，膝正交线圈(QD). 于MCAO后12 h（行神经行为学评分后）再次麻醉，仰卧位固定，行头颅T2WI检查.
各组大鼠在MCAO后12 h行MRI检查后，深麻醉，断头取脑，将大脑整体标本置于20 g/L TTC溶液中37℃孵育30 min，可见边界清楚的脑梗死灶. 用数码相机拍照后，再将大脑置于-20℃冰箱中快速冷冻15 min，以视交叉平面为中心连续冠状切片5张，厚度5 mm，重复上述染色约30 min，可在冠状位见白色梗死灶. 将脑片置入40 g/L多聚甲醛溶液中固定过夜，用数码相机拍照. 经电脑图像分析量化脑梗死绝对体积占对侧大脑半球体积的百分比，即相对脑梗死体积.
统计学处理： Longa评分以等级资料表示，采用秩和检验；率的比较采用χ2检验；计量数据用x±s表示，行t检验. 采用SPSS10.0统计软件包进行统计分析. 检验水准α上一页 [1] [2] [3] [4] 下一页
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