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关于体外肝代谢系统的研究与应用 |
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，其中硫酸结合物占尿液中总代谢物的2%～3%［18］。因此BPA肝细胞体外温孵与体内过程很相似，具有一定的代表性。
3.2.2进行药物体外代谢清除研究
Shibata［19］等人运用冷藏保存的人肝细胞混悬于100%的人血浆中，将预测的肝利用度及清除率与14种临床常用的药物的生物利用度和血浆清除率进行比较时，发现不同的细胞来源，内在清除率存在极大的个体差异性。同时在基础的生物定标系数（3.1×109 个/kg）下，用外推法将体外实验结果应用于体内实验的预测，往往会出现明显的偏低现象，因此计算的定标系数应比基础生物大3～5倍。为获得更可靠的定量预测结果，通过预试验来确定校正的定标系数是至关重要的环节。
由于在新鲜分离的肝细胞中，介导药物代谢的CYP450酶系存在时间依赖性衰减的现象，所以一般的肝细胞培养都要求在肝细胞生存时间跨度内进行。Griffin和Houston ［20］对体外单层肝细胞培养的内在清除能力（CLint）与新鲜游离肝细胞悬液的清除能力进行比较，发现其内在的清除能力与代谢速度有关，单层肝细胞体外实验更适合于代谢速度慢的药物。
总之，用肝细胞培养方法作为评价药物代谢的体外系统，存在一定的偏差。其结果与体内的情况相近程度，很大程度上取决于研究者的经验。
3.2.3参与新型多器官共培养的研究
在很长一段时间内，研究者都只是单纯考察药物代谢在某一种器官（如肝脏）中的作用情况。而实际上，药物在体内的过程是多因素综合作用的。根据最新报道［21］， 肝细胞参与整体非连续性多器官共培养体系（IdMOC），即把肝细胞和来自于其他多个器官的非肝原代细胞一起培养，为在药物代谢和毒副效应方面评价多器官之间的相互作用提供可能性。
肝细胞同肝微粒体相比，在代谢物生成、体外代谢清除等研究方面有许多相似性，但针对代谢物种类、主要代谢物及所反映的代谢特性上存在着质或量的差异。随着肝细胞冷冻技术的发展，因其体外活性维持时间短而造成的应用限制会不断得到改善。 4肝组织切片
在各种器官组织切片中以肝切片的应用最多，可在较长的孵育时间内保持代谢活性。据报道，小鼠肝切片可培育3～5 d［22］。组织切片的实验与培育条件使得其重现性比灌注器官的重现性容易得多。切片制备相对快捷而简便。但其缺点为切片机的大量使用受限，而且价格昂贵。De Kanter［23］等利用利多卡因、睾酮及7乙氧基香豆素为探针药物，进行了器官切片实验，结果表明，该系统具有多相代谢途径，且易于比较不同器官组织的代谢差别。研究发现不同种属及不同器官间代谢类型及速度不同。
Vickers［24］用肝組织切片研究环孢素A（CSA）的代谢，CSA本身是CYP3A4的底物，但在人肝切片中加入1～10 mol/L CSA培育24 h，使CYP3A4活性降低了25%，说明在CSA高浓度时可减少本身的清除率而提高血药浓度。若用某些疾病的标记物加入肝组织切片中培育，也可研究药物的不良反应如对肝的损害（以GSP或核基质蛋白Numa为标记物）或对脂质代谢的影响（以Lp(a)为标记物）等。
组织切片完整地保留了所有的肝药酶及细胞器的活性，而且保留了一定的细胞间质。这些特点相比于分子水平和细胞水平，更具宏观性与整体性，更能反映药物在体内生理情况下的实际代谢过程，为分子理论与离体器官之间，乃至临床应用架起了桥梁。
5离体肝灌流
5.1肝脏灌注的特点
肝脏灌流技术作为一种与在体肝脏最具可比性的体外系统，有其突出的优点 是可以在接近生理状况的条件下进行肝功能研究，保持完整细胞的天然屏障和营养液的供给，能排除其他组织、脏器的干扰及便于动态定量分析受试物及其代谢产物。因而离体器官灌注处于体内与体外的临界点。然而肝脏灌流技术亦存在缺陷，如受时间的限制、易受其他因素的干扰（如手术操作、灌流液组成、流速等）,手术及插管操作技术极复杂。
5.2离体肝灌流的主要应用
5.2.1持续考察药物代谢
利用离体肝的生理活性进行持续性的药物代谢考察及某些生命物质与药物之间的相互作用，以上一页 [1] [2] [3] [4] [5] [6] 下一页
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